granzyme A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (bovine): sc-437323

Panoramica

La granzima A (GZMA) è una proteasi serinica di tipo tripsina (triptasi), immagazzinata nei granuli dei linfociti citotossici e rilasciata durante la formazione della sinapsi immunologica per favorire il danno alle cellule bersaglio e la segnalazione infiammatoria. Nei sistemi bovini, l’attività di GZMA contribuisce all’immunità cellulo-mediata partecipando a programmi proteolitici che possono influenzare la morte cellulare indipendente dalle caspasi, le perturbazioni mitocondriali e le risposte al danno degli acidi nucleici. Oltre alla citotossicità diretta, la granzima A è stata associata alla modulazione delle reti di citochine e delle vie dell’immunità innata che determinano il reclutamento leucocitario e le risposte guidate dall’antigene. Alterazioni delle funzioni effettrici dipendenti dalle granzimi sono rilevanti per studi sulla disregolazione immunitaria, l’infiammazione cronica e le interazioni ospite–patogeno in immunologia veterinaria e comparata.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO granzyme A (bovine) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene in linee cellulari bovine. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina granzyme A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di per lo studio della segnalazione di granzyme A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni critici per la funzione di granzyme A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal granzyme A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (bovine) e dal granzyme A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (bovine2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus . Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal granzyme A Plasmide HDR (bovine) e il plasmide HDR granzyme A (bovine2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.