Plásmido Doble Nickase (h) GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptor: sc-400071-NIC

NR3C1 codifica el receptor de glucocorticoides (GR), un receptor nuclear activado por ligando que traduce las señales del cortisol y de los glucocorticoides sintéticos en programas de transcripción dependientes del contexto. Tras la unión de la hormona, el GR experimenta una activación dependiente de chaperonas, se transloca al núcleo y se une al ADN en elementos de respuesta a glucocorticoides, a la vez que también modula otros factores de transcripción como NF-κB y AP-1. Mediante estos mecanismos, el GR regula la señalización inflamatoria e inmunitaria, el metabolismo celular, las respuestas al estrés vinculadas al ritmo circadiano y la apoptosis, integrando señales de las vías endocrinas y de citocinas. La señalización o la expresión desreguladas de NR3C1 se han implicado en la resistencia a glucocorticoides y en una regulación anómala del eje del estrés, con relevancia para trastornos inflamatorios y cánceres sensibles a hormonas, en los que el GR puede influir en la proliferación y en la respuesta al tratamiento.

GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptor El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NR3C1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NR3C1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NR3C1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NR3C1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.