GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptor Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400071-ACT

NR3C1 codifica o receptor de glicocorticoides (GR), um receptor nuclear ativado por ligante que transloca para o núcleo após a ligação do hormônio e regula a transcrição por meio de elementos de resposta a glicocorticoides, bem como por interações de “tethering” com fatores como NF-κB e AP-1. A sinalização do GR integra sinais endócrinos ao remodelamento da cromatina para controlar programas gênicos inflamatórios, a homeostase metabólica, a diferenciação celular e respostas ao estresse. Por meio de crosstalk com as vias de sinalização MAPK, PI3K–AKT e de citocinas, o NR3C1 ajuda a ajustar redes transcricionais específicas de cada tipo celular e a regulação por feedback do eixo hipotálamo–hipófise–adrenal. A expressão ou função desregulada de NR3C1 tem sido associada a responsividade alterada aos glicocorticoides e é frequentemente estudada em contextos de desregulação imune, biologia do estresse neuropsiquiátrico e adaptação de células cancerosas a estressores do microambiente.

GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NR3C1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NR3C1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NR3C1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptor. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NR3C1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptor no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GR/NR3C1/Glucocorticoid Receptor em células tumorais com expressão de NR3C1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.