GPR171 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-412047

Panoramica

GPR171 codifica un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) orfano di classe A (simile alla rodopsina), prevalentemente associato a segnalazione inibitoria, ed è implicato nella modulazione del cAMP intracellulare e dei programmi trascrizionali a valle. È espresso in contesti immunitari e neurali, dove è stato collegato alla regolazione del tono della segnalazione cellulare, dei circuiti neuromodulatori e della responsività infiammatoria. Le interazioni riportate con il neuropeptide BigLEN suggeriscono un ruolo nella segnalazione GPCR mediata da peptidi e nel controllo, a livello di rete, degli stati di attivazione cellulare. Alterazioni della segnalazione GPCR che coinvolgono GPR171 sono state esplorate in relazione a fenotipi neurocomportamentali e alla regolazione immunitaria, a supporto della sua rilevanza per studi a livello di via sulla trasduzione del segnale mediata da recettori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR171 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GPR171 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GPR171 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GPR171 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GPR171.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GPR171 per lo studio della segnalazione di GPR171, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GPR171 critici per la funzione di GPR171
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GPR171 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GPR171 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GPR171 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GPR171. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GPR171 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GPR171 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GPR171 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GPR171 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.