golgin 245 Double Nickase Plasmid (h): sc-404412-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das golgin 245 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- golgin 245 Double-Nickase-Plasmid (h) und golgin 245 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GOLGA4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: golgin 245: sc-514775
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
golgin 245 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404412-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
golgin 245 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404412-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GOLGA4 kodiert Golgin-245, ein Coiled-Coil-Protein der Golgi-Matrix, das zur Organisation des Golgi-Bands (Golgi-Ribbon) und zur Vesikel-Anheftung (Tethering) beiträgt, die für eine effiziente Sortierung von Frachtproteinen entlang des sekretorischen Wegs erforderlich ist. Golgin-245 ist an Membrantransportprozessen beteiligt, die den retrograden und anterograden Transport zwischen dem Golgi-Apparat und endosomalen Kompartimenten koordinieren, wodurch die korrekte Verteilung von Glykosylierungsenzymen und die Aufrechterhaltung der Golgi-Architektur unterstützt werden. Störungen in Golgi-Tethering- und Trafficking-Netzwerken stehen mit veränderter Zellpolarität, Stresssignalgebung und Defekten in der Proteinprozessierung in Zusammenhang, wie sie häufig in Kontexten von Krebs und neurodegenerativen Erkrankungen beobachtet werden. Als Marker und Regulator der Golgi-Dynamik wird Golgin-245 häufig eingesetzt, um Organellenorganisation, Vesikeltransport und proteostasebezogene Signalwege in menschlichen Zellen zu untersuchen.
golgin 245 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GOLGA4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GOLGA4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GOLGA4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GOLGA4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.