golgin 160 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403862-NIC

GOLGA3 codifica a golgina 160, uma golgina de hélice-enrolada (coiled-coil) localizada no aparelho de Golgi que ajuda a organizar a arquitetura do Golgi e dá suporte à ancoragem e ao tráfego de vesículas entre compartimentos do sistema endomembranar. Como parte da via secretória, a golgina 160 contribui para a triagem de cargas e para a manutenção da integridade da “fita” do Golgi (Golgi ribbon), influenciando o processamento de proteínas e sua entrega a destinos posteriores. A disrupção de programas de ancoragem e tráfego do Golgi está associada a respostas ao estresse celular, sinalização alterada e mudanças na polaridade e migração celulares, tornando o GOLGA3 um alvo relevante para estudar mecanismos que conectam a organização de organelas a fenótipos associados a doenças. Na pesquisa biomédica, a função da golgina 160 é frequentemente investigada no contexto da dinâmica de membranas, da regulação da via secretória e de perturbações da proteostase dependente do Golgi.

golgin 160 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus GOLGA3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de GOLGA3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função GOLGA3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com GOLGA3 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.