Plásmido CRISPR de Activación (h) Glutathione Peroxidase 4/GPX4: sc-401558-ACT

GPX4 (glutatión peroxidasa 4) codifica una fosfolípido-hidroperoxidasa dependiente de selenio que reduce los hidroperóxidos lipídicos de membrana utilizando glutatión, manteniendo la homeostasis redox y preservando la integridad de la membrana. Como supresor central de la ferroptosis, GPX4 se integra con el metabolismo del glutatión, el control de la peroxidación lipídica y las vías de defensa antioxidante, influyendo en las respuestas al estrés oxidativo asociadas a la mitocondria y al retículo endoplásmico. La actividad desregulada de GPX4 se ha vinculado con una sensibilidad alterada al daño oxidativo y a la muerte celular ferroptótica en contextos que incluyen la biología del cáncer, la neurodegeneración y el daño tisular inflamatorio. Por ello, su expresión y capacidad enzimática se estudian ampliamente en modelos de acumulación de ROS lipídicas, muerte celular dependiente de hierro y señalización de adaptación al estrés.

Glutathione Peroxidase 4/GPX4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GPX4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Glutathione Peroxidase 4/GPX4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GPX4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GPX4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Glutathione Peroxidase 4/GPX4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GPX4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Glutathione Peroxidase 4/GPX4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Glutathione Peroxidase 4/GPX4 en células tumorales con expresión de GPX4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.