Plásmido Doble Nickase (h) GLDC: sc-403511-NIC

GLDC codifica la glicina descarboxilasa, el componente proteína P del sistema mitocondrial de escisión de la glicina, que cataliza la descarboxilación de la glicina y transfiere la unidad de un carbono resultante al tetrahidrofolato. A través de esta reacción, GLDC conecta el catabolismo de la glicina con el metabolismo de un carbono mediado por folatos, influyendo en el equilibrio redox mitocondrial, la biosíntesis de nucleótidos y la capacidad de metilación celular. La actividad de GLDC se integra con la homeostasis de aminoácidos y las vías energéticas mitocondriales al contribuir a la generación de NADH y regular el flujo de carbono derivado de la glicina. La desregulación o pérdida de la función de GLDC se asocia con un manejo alterado de la glicina y con perturbaciones en las rutas del metabolismo de un carbono, relevantes para errores innatos del metabolismo y dependencias metabólicas dependientes del contexto en modelos de enfermedad.

GLDC El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GLDC en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GLDC. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GLDC. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GLDC alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.