Plasmide CRISPR/Cas9 KO GHR (m): sc-420549

Présentation

Le récepteur de l’hormone de croissance (GHR), codé chez la souris par le gène *Ghr*, est un récepteur de cytokine à passage unique qui transmet le signal de l’hormone de croissance afin de réguler la croissance somatique, le métabolisme et l’homéostasie endocrinienne. La dimérisation du récepteur induite par le ligand active JAK2 et, en aval, des programmes transcriptionnels dépendants de STAT5, avec en outre des interactions avec les voies PI3K–AKT et MAPK, qui influencent la prolifération, la gestion des nutriments et la survie cellulaire. La signalisation dépendante de GHR module la production hépatique d’IGF‑1 et la sensibilité systémique à l’insuline, reliant ainsi l’activité du récepteur aux phénotypes de croissance et métaboliques. Un dysfonctionnement de l’axe GH–GHR est pertinent pour la recherche sur les troubles de la croissance, la résistance à l’insuline et le remodelage tissulaire dans des contextes endocriniens et développementaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GHR (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ghr dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ghr, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ghr à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GHR.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ghr pour l'étude de la signalisation de GHR, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ghr essentiels à la fonction de GHR
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ghr pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GHR plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le GHR plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ghr. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GHR plasmide HDR (m) et le GHR (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ghr pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ghr définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.