Plasmide CRISPR/Cas9 KO GFRα-1 (m): sc-420539

Présentation

Gfra1 code pour GFRα‑1, un co‑récepteur ancré à la membrane via un glycosylphosphatidylinositol (GPI) qui se lie au facteur neurotrophique dérivé des cellules gliales (GDNF) et le présente à la tyrosine kinase RET afin d’initier la signalisation en aval. Ce complexe ligand–récepteur régule la survie neuronale, la croissance des neurites et la différenciation via des voies comprenant PI3K–AKT, MAPK/ERK et une signalisation dépendante de PLCγ, avec des rôles supplémentaires dans les tissus dérivés de la crête neurale. Chez la souris, l’activité de GFRα‑1 est également impliquée dans la morphogenèse rénale et le maintien des cellules souches spermatogoniales, ce qui reflète une fonction plus large dans les programmes de développement et d’homéostasie tissulaire. La dérégulation de la signalisation GDNF–GFRα‑1–RET est largement utilisée comme cadre mécanistique pour étudier les défauts du neurodéveloppement, la neurodégénérescence et les phénotypes cellulaires dépendants de RET dans des modèles expérimentaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GFRα-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Gfra1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Gfra1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Gfra1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GFRα-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Gfra1 pour l'étude de la signalisation de GFRα-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Gfra1 essentiels à la fonction de GFRα-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Gfra1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GFRα-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le GFRα-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Gfra1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GFRα-1 plasmide HDR (m) et le GFRα-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Gfra1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Gfra1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.