GCN1L1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-411545

Panoramica

GCN1 (che codifica GCN1L1) è un cofattore conservato della risposta integrata allo stress che sostiene il controllo della traduzione mediato dal rilevamento degli amminoacidi attraverso l’asse GCN2–eIF2α. Facilitando l’attivazione delle chinasi di eIF2α in condizioni di limitazione dei nutrienti e di stress associato ai ribosomi, GCN1L1 contribuisce a un’attenuazione globale della traduzione e all’induzione selettiva di programmi di adattamento allo stress, come la trascrizione dipendente da ATF4. Questa regolazione collega GCN1L1 alla proteostasi, alle risposte allo stress ossidativo e mitocondriale e, più in generale, all’omeostasi metabolica. La disregolazione della segnalazione dello stress traduttivo e delle vie di risposta ai nutrienti in cui opera GCN1L1 è stata associata a fenotipi rilevanti per la biologia del cancro, la neurodegenerazione e gli stati infiammatori, a supporto di studi meccanicistici in modelli cellulari umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GCN1L1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GCN1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GCN1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GCN1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GCN1L1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GCN1 per lo studio della segnalazione di GCN1L1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GCN1 critici per la funzione di GCN1L1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GCN1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GCN1L1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GCN1L1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GCN1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GCN1L1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GCN1L1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GCN1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GCN1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.