GBP2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402140-ACT

Humanes GBP2 kodiert das Guanylat-bindende Protein 2, eine durch Interferon induzierbare große GTPase, die an intrazellulären Membranen lokalisiert und die zellintrinsische Immunität gegen verschiedene Pathogene unterstützt. GBP2 ist Teil angeborener Immun-Signalnetzwerke downstream von IFN-γ/STAT1 und trägt zu inflammasomassoziierten Prozessen, antimikrobieller Restriktion und zum Umbau pathogenhaltiger Kompartimente bei. Indem GBP2 Programme interferon-stimulierter Gene und entzündliche Output-Signale mitprägt, wurde eine veränderte GBP2-Expression mit Immundysregulation und entzündlichen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht; zudem wird GBP2 in Krebs- und Infektionsmodellen häufig als Marker und Mediator interferongetriebener Antworten untersucht.

GBP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GBP2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GBP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GBP2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GBP2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GBP2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GBP2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GBP2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GBP2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GBP2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.