Plasmide Double Nickase (h) GATA-6: sc-400724-NIC

GATA6 code le facteur de transcription à doigts de zinc GATA-6, un régulateur déterminant de lignée de la différenciation endodermique et mésodermique, qui contrôle des réseaux de gènes impliqués dans l’organogenèse, l’identité épithéliale et les programmes du muscle lisse. Dans les cellules humaines, GATA-6 intègre des signaux de développement pour moduler des circuits transcriptionnels régissant la prolifération, la migration et l’engagement du destin cellulaire, notamment des voies liées à la mise en place de patrons dépendante de Wnt, BMP et Notch. Une expression dérégulée de GATA6 ou des altérations du nombre de copies ont été associées à des anomalies congénitales du développement ainsi qu’à des états transcriptionnels, selon le contexte, oncogéniques ou suppresseurs de tumeurs au sein de lignages gastro-intestinaux, pancréatiques et pulmonaires. Ces propriétés font de GATA-6 un nœud utile pour disséquer le contrôle transcriptionnel de la différenciation, la plasticité de lignée et le remodelage adaptatif au stress dans des modèles pertinents pour les maladies.

GATA-6 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GATA6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GATA6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GATA6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GATA6.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.