Plasmide CRISPR/Cas9 KO GATA-2 (m): sc-420494

Présentation

Gata2 code le facteur de transcription à doigts de zinc GATA-2, un régulateur central du maintien des cellules souches et progénitrices hématopoïétiques et de l’amorçage des lignages chez la souris. GATA-2 se lie aux motifs GATA pour contrôler des réseaux transcriptionnels régissant l’auto-renouvellement, la quiescence et la différenciation, et il interagit fonctionnellement avec des programmes de signalisation des cytokines ainsi qu’avec des régulateurs hématopoïétiques majeurs tels que RUNX1, TAL1 et SPI1/PU.1. Outre l’hématopoïèse, GATA-2 contribue au développement vasculaire et lymphatique ainsi qu’aux programmes géniques endothéliaux. Une activité de Gata2 dérégulée est associée à un développement hématopoïétique aberrant et à des perturbations de l’homéostasie des cellules immunitaires, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier les mécanismes de formation du sang et les physiopathologies associées.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GATA-2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Gata2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Gata2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Gata2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GATA-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Gata2 pour l'étude de la signalisation de GATA-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Gata2 essentiels à la fonction de GATA-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Gata2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GATA-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le GATA-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Gata2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GATA-2 plasmide HDR (m) et le GATA-2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Gata2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Gata2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.