GAS41 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404113-ACT

YEATS4 codifica GAS41, una proteina nucleare contenente un dominio YEATS che funge da regolatore della trascrizione associato alla cromatina. GAS41 partecipa al rimodellamento della cromatina e alla segnalazione collegata all’acetilazione degli istoni, inclusa l’interazione con complessi multiproteici implicati nell’espressione genica dipendente dall’RNA polimerasi II e nel controllo del ciclo cellulare. Attraverso questi meccanismi epigenetici, YEATS4 influenza la proliferazione, la regolazione del genoma e le risposte cellulari allo stress. Un’attività deregolata di YEATS4/GAS41 è stata riportata in contesti associati al cancro, a supporto del suo studio nei programmi trascrizionali oncogenici e nella biologia delle malattie guidata dalla cromatina.

GAS41 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di YEATS4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GAS41 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus YEATS4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione YEATS4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GAS41. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus YEATS4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GAS41 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GAS41 nelle cellule tumorali con espressione di YEATS4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.