GAP1^m Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-431130

Descripción general

Rasa2 codifica la proteína activadora de la GTPasa Ras GAP1m, un regulador negativo de la señalización de Ras que acelera la hidrólisis de GTP para limitar la salida de las vías MAPK/ERK y PI3K/AKT. Al ajustar la amplitud y la duración de la actividad de Ras, GAP1m influye en la progresión del ciclo celular, las señales de diferenciación y la dinámica del citoesqueleto que determinan la migración y la adhesión. En modelos murinos, la alteración de la función de Rasa2 se ha asociado con una señalización desregulada por factores de crecimiento y con fenotipos inmunitarios y del desarrollo anómalos, lo que la hace relevante para estudiar la reconfiguración de redes impulsada por Ras en contextos pertinentes para la enfermedad. Su posición como freno de la señalización respalda investigaciones mecanísticas sobre la retroalimentación de las vías, la integración de señales y el reclutamiento de efectores de Ras dependiente del contexto.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GAP1m (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Rasa2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Rasa2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Rasa2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GAP1m.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Rasa2 para la investigación de la señalización de GAP1m, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Rasa2 críticos para la función de GAP1m
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Rasa2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GAP1m CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido GAP1m CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Rasa2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GAP1m (m) y el plásmido HDR GAP1m (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Rasa2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Rasa2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.