Plasmide CRISPR/Cas9 KO GALK1 (h): sc-405217

Présentation

GALK1 code la galactokinase 1, une enzyme cytosolique qui catalyse la phosphorylation de l’α‑D‑galactose en galactose‑1‑phosphate, initiant ainsi le flux dans la voie de Leloir pour l’utilisation du galactose. En contrôlant l’entrée du galactose dans les voies de la glycolyse et de la biosynthèse des glycoconjugués, l’activité de GALK1 contribue au métabolisme énergétique cellulaire et à l’homéostasie des glycannes. Une perturbation de la prise en charge du galactose est associée à des erreurs innées du métabolisme, et une altération de la voie de Leloir peut influencer les réponses au stress oxydatif ainsi que la toxicité de certains métabolites dans divers contextes cellulaires. GALK1 est donc pertinente pour l’étude du métabolisme des glucides, du remaniement métabolique et des effets en aval sur la glycosylation des protéines et des lipides.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GALK1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GALK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GALK1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GALK1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GALK1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GALK1 pour l'étude de la signalisation de GALK1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GALK1 essentiels à la fonction de GALK1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GALK1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GALK1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GALK1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GALK1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GALK1 plasmide HDR (h) et le GALK1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GALK1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GALK1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.