Plasmide CRISPR d'Activation (h) Galanin: sc-402730-ACT

Le gène humain **GAL** code la galanine, un neuropeptide sécrété qui transmet des signaux via des récepteurs couplés aux protéines G (GALR1–3) afin de réguler l’excitabilité neuronale, la libération de neurotransmetteurs et la fonction neuroendocrinienne. La galanine module des voies de seconds messagers, notamment **cAMP/PKA**, **MAPK/ERK** et la signalisation calcique, influençant des processus tels que la régulation de l’appétit, la nociception, la réponse au stress et le contrôle autonome. Dans le système nerveux et les tissus périphériques, l’activité de GAL contribue à la plasticité synaptique et au dialogue neuro-immunitaire, ce qui la rend pertinente pour des études mécanistiques de phénotypes neurologiques et métaboliques. Des altérations de la signalisation de la galanine ont été associées dans la littérature à des troubles impliquant le traitement de la douleur, la régulation de l’humeur, la susceptibilité aux crises et l’homéostasie énergétique, ce qui étaye son utilisation comme nœud de voie dans des modèles pertinents pour les maladies.

Galanin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GAL sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Galanin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GAL dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GAL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Galanin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GAL natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Galanin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Galanin dans les cellules tumorales présentant une expression de GAL silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.