GABP-β1/2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404040-NIC

GA結合タンパク質サブユニットβ1（GABPB1）は、GABPAとヘテロ二量体を形成してETSファミリー転写因子GABPを構成するβ1/β2パートナーをコードする。GABPはGAに富むプロモーター配列に結合し、細胞周期の進行、ミトコンドリア生合成、プロテオスタシスを制御する遺伝子発現プログラムを統合的に調節する。GABP複合体は核コードのミトコンドリア遺伝子や酸化的リン酸化能を制御し、またTERTプロモーターの調節を介してテロメア維持の転写制御にも寄与する。これらの機能を通じて、GABPB1は細胞代謝、ストレス適応、系譜特異的な転写ネットワークを司る経路と交差する。GABPシグナルの破綻やGABPB1依存的な転写出力の変化は、腫瘍生物学やミトコンドリア機能／転写制御の異常を伴う疾患の文脈で関与が示唆されており、遺伝子制御機構と細胞フィットネスに関する機序研究を支持する。

GABP-β1/2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GABPB1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GABPB1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GABPB1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GABPB1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。