GABP-β1/2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404040-ACT

GABPB1 codifica la subunità beta-1/2 della proteina GA-binding (GABP-β1/2), partner obbligato della subunità di legame al DNA della famiglia ETS, con la quale forma il complesso del fattore di trascrizione GABP. Questo complesso regola programmi di promotori ed enhancer che controllano la biogenesi e la respirazione mitocondriale, la progressione del ciclo cellulare e la differenziazione, coordinando l’espressione di geni mitocondriali codificati dal nucleo e di altri bersagli associati alla crescita. La segnalazione di GABP interseca vie che sostengono l’omeostasi energetica cellulare, la capacità proliferativa e la specificazione di linea, e un’alterata attività di GABP è stata collegata a reti trascrizionali deregolate nel cancro e in altri disturbi del metabolismo cellulare. Poiché GABP integra la trascrizione dipendente da ETS con programmi mitocondriali e biosintetici, GABPB1 è spesso studiato in contesti quali la fosforilazione ossidativa, l’adattamento allo stress e il rimodellamento oncogenico della trascrizione.

GABP-β1/2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GABPB1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GABP-β1/2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GABPB1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GABPB1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GABP-β1/2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GABPB1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GABP-β1/2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GABP-β1/2 nelle cellule tumorali con espressione di GABPB1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.