Fucokinase CRISPR Activationプラスミド (h): sc-409449-ACT

ヒトFUKはフコキナーゼをコードしており、これは細胞質に存在するキナーゼで、L-フコースをフコース-1-リン酸へとリン酸化します。これにより、フコシル化反応に必要なGDP-フコースを補充するL-フコース・サルベージ経路が開始されます。ヌクレオチド糖の恒常性を支えることで、フコキナーゼはタンパク質のフォールディング、受容体シグナル伝達、細胞間相互作用を制御するゴルジ体および小胞体（ER）関連の糖鎖付加プロセスに寄与します。フコース代謝の変化やフコシル化の破綻は、免疫調節や炎症、腫瘍に関連する糖鎖シグネチャーの変化と関連づけられており、FUKは細胞表現型に対する糖代謝制御を研究する上で有用な結節点となります。FUK発現を実験的に操作することで、サルベージ経路由来のGDP-フコースが、ストレスや分化といった状況における糖タンパク質および糖脂質のリモデリングにどのように影響するかを解明できます。

Fucokinase CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FUKの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Fucokinase CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FUK 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFUK転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Fucokinaseの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFUK遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFucokinase依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFUK発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFucokinase経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。