Plasmide CRISPR d'Activation (h) FRRS1L: sc-407611-ACT

FRRS1L (ferric chelate reductase 1 like) code une protéine neuronale associée au réticulum endoplasmique, impliquée dans la maturation et la régulation fonctionnelle des récepteurs du glutamate de type AMPA. En favorisant l’assemblage et le trafic des récepteurs ainsi que leur localisation synaptique, FRRS1L contribue à la neurotransmission excitatrice, à la plasticité synaptique et aux réseaux de signalisation dépendants de l’activité dans le système nerveux central. Une altération de la fonction de FRRS1L a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et épileptiques, cohérents avec une signalisation glutamatergique perturbée et une excitabilité modifiée des réseaux neuronaux. Ces caractéristiques font de FRRS1L une cible pertinente pour l’étude de la biologie des synapses, de la protéostasie des récepteurs et des voies qui gouvernent le développement neuronal et le fonctionnement des circuits.

FRRS1L Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FRRS1L sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FRRS1L Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FRRS1L dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FRRS1L, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FRRS1L. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FRRS1L natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FRRS1L au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FRRS1L dans les cellules tumorales présentant une expression de FRRS1L silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.