FRP-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422899

Übersicht

Sfrp4 kodiert das sekretierte frizzled-related Protein 4 (FRP-4), einen löslichen Modulator der Wnt-Signalübertragung, der an Wnt-Liganden und/oder Frizzled-Rezeptoren bindet und so den Output β‑Catenin‑abhängiger sowie nichtkanonischer Signalwege feinabstimmt. In Mausgeweben trägt FRP-4 zur Regulation von Zellschicksalsentscheidungen, Proliferation, Umbau der extrazellulären Matrix und Differenzierungsprogrammen bei, die für die Entwicklungsmusterung und die Gewebehomöostase wichtig sind. Eine veränderte Sfrp4-Expression wurde mit fehlregulierter Wnt-Signalwegaktivität in Kontexten wie Fibrose, metabolischem Gewebeumbau und Tumorbiologie in Verbindung gebracht, wobei Verschiebungen im Wnt-Signalton epithelial-mesenchymale Interaktionen und stromale Antworten beeinflussen können. Als sekretierter Signalwegregulator wird Sfrp4 häufig in Netzwerken des Signalweg-Crosstalk untersucht, die Wnt mit TGF‑β, inflammatorischen Signalen und lineagespezifizierenden Transkriptionsprogrammen integrieren.

Das FRP-4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Sfrp4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Sfrp4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Sfrp4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FRP-4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Sfrp4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FRP-4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Sfrp4-Exone abzielen, die für die FRP-4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Sfrp4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FRP-4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom FRP-4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Sfrp4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FRP-4 HDR-Plasmid (m) und FRP-4 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Sfrp4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Sfrp4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.