Fra2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400250-ACT

Il gene umano **FOSL2** codifica **Fra2** (antigene 2 simile a FOS), un fattore di trascrizione bZIP che eterodimerizza con le proteine **JUN** per formare complessi **AP-1** che regolano l’espressione genica in risposta agli stimoli. Fra2 integra la segnalazione **MAPK/ERK** e **JNK** per controllare programmi legati alla progressione del ciclo cellulare, alla differenziazione, al rimodellamento della matrice extracellulare e alle risposte infiammatorie. Un’attività deregolata di **FOSL2/AP-1** è stata associata a stati trascrizionali oncogenici, fibrosi tissutale e infiammazione cronica, rendendolo un nodo utile per analizzare il controllo trascrizionale delle vie di stress e dei fattori di crescita. Le reti regolatorie dipendenti da Fra2 vengono comunemente studiate in contesti quali la transizione epitelio-mesenchimale, l’attivazione stromale e la segnalazione guidata dalle citochine.

Fra2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FOSL2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Fra2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FOSL2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FOSL2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Fra2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FOSL2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Fra2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Fra2 nelle cellule tumorali con espressione di FOSL2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.