Partículas Lentivirales de Activación (h) FLIP_S/L: sc-400400-LAC

CFLAR codifica la proteína celular inhibidora de FLICE (FLIP S/L), un homólogo de la caspasa-8 catalíticamente inactivo que modula la señalización de los receptores de muerte al controlar el ensamblaje del DISC y la activación de la caspasa-8. A través de estas interacciones, las isoformas de FLIP ajustan la apoptosis extrínseca, influyen en la decisión entre necroptosis y apoptosis, y modelan la señalización inflamatoria vinculada a NF-κB aguas abajo de TNFR1 y de los receptores Fas/TRAIL. La expresión alterada de CFLAR se asocia con frecuencia a fenotipos de resistencia a la apoptosis y evasión inmunitaria, lo que la hace relevante para estudios sobre la supervivencia de células tumorales, la inflamación crónica y las interacciones hospedador–patógeno. CFLAR también se utiliza para investigar mecanismos de señalización de supervivencia inducida por citocinas y el diálogo cruzado entre vías apoptóticas y de inmunidad innata.

Las partículas de activación lentiviral FLIPS/L (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de CFLAR en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral FLIPS/L (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción CFLAR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de FLIPS/L. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo CFLAR y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.