FLG/Filaggrin Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400644-NIC

FLG codifica a filagrina, uma proteína estrutural fundamental produzida como profilagrina em queratinócitos em diferenciação e processada proteoliticamente em monómeros de filagrina, que agregam os filamentos intermédios de queratina. Esta função sustenta a diferenciação terminal da epiderme, a compactação dos corneócitos e a formação da barreira do estrato córneo, e os seus produtos adicionais de degradação contribuem para os fatores naturais de hidratação que regulam a hidratação e o pH da superfície cutânea. A atividade de FLG está integrada com os programas de queratinização e de montagem do envelope cornificado a jusante das redes de sinalização da diferenciação epidérmica. A variação genética ou a redução da expressão de filagrina está fortemente associada a fenótipos de disfunção da barreira e à suscetibilidade a doenças inflamatórias da pele, tornando o FLG um alvo frequente em estudos da homeostase epitelial e dos mecanismos de inflamação cutânea.

FLG/Filaggrin O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus FLG em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de FLG. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função FLG. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com FLG interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.