FLG/Filaggrin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400644

Descripción general

FLG codifica la filagrina, una proteína clave de la diferenciación epidérmica que se produce como profilagrina en los gránulos de queratohialina y se procesa en repeticiones de filagrina que agregan los filamentos intermedios de queratina durante la maduración terminal de los queratinocitos. Los productos de degradación de la filagrina contribuyen al factor natural de hidratación, lo que favorece la hidratación del estrato córneo, la homeostasis del pH y la integridad de la barrera cutánea. A través de estas funciones, FLG se relaciona con la formación de la envoltura córnea, la organización lipídica y la señalización inflamatoria vinculada al estrés de la barrera. Las variantes con pérdida de función o la expresión reducida se asocian con fenotipos de barrera cutánea alterada y se estudian ampliamente en modelos de dermatitis atópica e ictiosis vulgar.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FLG/Filaggrin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FLG en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FLG junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FLG tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FLG/Filaggrin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FLG para la investigación de la señalización de FLG/Filaggrin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de FLG críticos para la función de FLG/Filaggrin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FLG para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FLG/Filaggrin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido FLG/Filaggrin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FLG. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FLG/Filaggrin (h) y el plásmido HDR FLG/Filaggrin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FLG para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FLG definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.