Plasmide Double Nickase (h) FKBP12.6: sc-401445-NIC

FKBP1B code pour FKBP12.6, une petite immunophiline isomérase peptidyl‑prolyl cis‑trans qui se lie à des ligands immunosuppresseurs et agit comme régulateur de la signalisation calcique. FKBP12.6 s’associe aux canaux récepteurs de la ryanodine, en particulier RyR2, afin de moduler la libération de Ca²⁺ depuis le réticulum sarcoplasmique/endoplasmique et le couplage excitation–contraction, en intégrant des signaux qui influencent le métabolisme mitochondrial et les réponses au stress. Par son activité de type chaperon et ses interactions protéine–protéine, FKBP12.6 exerce une influence sur la protéostase et sur l’ouverture/fermeture des canaux dépendante de la phosphorylation. Une activité dérégulée de FKBP1B/FKBP12.6 et une homéostasie du Ca²⁺ altérée ont été associées à l’arythmogénèse cardiaque et à d’autres phénotypes liés à la gestion du calcium, ce qui étaye des études mécanistiques dans les cardiomyocytes et des modèles de cellules excitables.

FKBP12.6 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FKBP1B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FKBP1B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FKBP1B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FKBP1B.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.