FIG4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404404

Descripción general

FIG4 codifica una fosfatasa 5 de fosfoinosítidos que regula el recambio del fosfatidilinositol 3,5-bisfosfato y de lípidos relacionados en las membranas endolisosomales. A través de su participación en complejos reguladores PIKfyve–VAC14–FIG4, FIG4 influye en el tráfico de endosoma a lisosoma, la autofagia, el reciclaje de membranas y el mantenimiento de la homeostasis lisosomal. La alteración de la actividad de FIG4 perturba la dinámica endolisosomal y las respuestas celulares al estrés, procesos centrales para el mantenimiento neuronal y la integridad de la mielina. Estudios genéticos en humanos vinculan la disfunción de FIG4 con fenotipos neurodegenerativos y del neurodesarrollo, lo que respalda su importancia en vías de tráfico de membranas relevantes para la biología del sistema nervioso.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FIG4 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FIG4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FIG4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FIG4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FIG4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FIG4 para la investigación de la señalización de FIG4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de FIG4 críticos para la función de FIG4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FIG4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FIG4 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido FIG4 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FIG4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FIG4 (h) y el plásmido HDR FIG4 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FIG4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FIG4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.