Fibrinogen α Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400793

Descripción general

FGA codifica la cadena α del fibrinógeno, una glicoproteína secretada de origen hepático que se ensambla con las cadenas β y γ para formar el fibrinógeno, el precursor soluble de la fibrina. Tras una lesión vascular, la escisión del fibrinógeno mediada por trombina inicia eventos de polimerización y entrecruzamiento que estabilizan los coágulos y favorecen la adhesión plaquetaria dentro de la cascada de coagulación. La fibrina(ógeno) también participa en la remodelación de la matriz extracelular y en la señalización inflamatoria mediante interacciones con integrinas y otros receptores, conectando la hemostasia con la reparación tisular. Las alteraciones en la función o la expresión de FGA se asocian con anomalías cuantitativas o cualitativas del fibrinógeno que afectan la formación del coágulo y pueden modificar los fenotipos trombóticos o hemorrágicos, por lo que resulta relevante para estudios de biología de la coagulación e inflamación vascular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Fibrinogen α (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FGA en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FGA junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FGA tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Fibrinogen α.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FGA para la investigación de la señalización de Fibrinogen α, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de FGA críticos para la función de Fibrinogen α
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FGA para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Fibrinogen α CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Fibrinogen α CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FGA. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Fibrinogen α (h) y el plásmido HDR Fibrinogen α (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FGA para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FGA definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.