Plasmide CRISPR/Cas9 KO Ferrochelatase (h): sc-402043

Présentation

FECH code la ferrochélatase humaine, une enzyme de la membrane interne mitochondriale qui catalyse l’insertion du fer ferreux dans la protoporphyrine IX pour produire l’hème, dernière étape de la voie de biosynthèse des porphyrines/de l’hème. En contrôlant la disponibilité de l’hème, la ferrochélatase influence la maturation érythroïde, la respiration mitochondriale, l’équilibre rédox et l’assemblage des hémoprotéines. Une altération de l’activité de FECH est associée à une accumulation de porphyrines et à une homéostasie de l’hème perturbée, avec un intérêt particulier dans la protoporphyrie érythropoïétique ainsi que dans des phénotypes plus larges de stress métabolique chez les cellules ayant une forte demande en hème. FECH est donc largement étudié en biologie mitochondriale, dans la gestion du fer et dans le métabolisme des porphyrines, notamment pour les réponses de cette voie aux perturbations oxydatives et métaboliques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Ferrochelatase (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FECH dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FECH, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FECH à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Ferrochelatase.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FECH pour l'étude de la signalisation de Ferrochelatase, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FECH essentiels à la fonction de Ferrochelatase
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FECH pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Ferrochelatase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Ferrochelatase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FECH. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Ferrochelatase plasmide HDR (h) et le Ferrochelatase (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FECH pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FECH définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.