Plásmido CRISPR de Activación (h) Fer: sc-402734-ACT

El gen humano **FER** codifica Fer, una tirosina quinasa proteica no receptora de la familia FES/Fer que transduce señales aguas abajo de receptores de factores de crecimiento y complejos de adhesión. Fer participa en el control dependiente de fosforilación de la dinámica del citoesqueleto, la integridad de las uniones célula–célula y la motilidad celular mediante vías que incluyen la señalización por integrinas, complejos asociados a cadherinas y la regulación de GTPasas de la familia Rho. Al modular las salidas de señalización asociadas a MAPK y PI3K/AKT, Fer ayuda a coordinar respuestas de proliferación y supervivencia ante señales extracelulares. La actividad o expresión desregulada de **FER** se ha relacionado con un comportamiento invasivo alterado y redes de señalización aberrantes en múltiples contextos relevantes para el cáncer, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en estudios de señalización oncogénica y fenotipos asociados a la metástasis.

Fer El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FER sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Fer El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FER en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FER, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Fer. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FER y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Fer en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Fer en células tumorales con expresión de FER silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.