EYA4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404355

Descripción general

EYA4 codifica un miembro de la familia Eyes Absent (EYA) que actúa como coactivador transcripcional y fosfatasa, integrando programas de señalización del desarrollo y de respuesta al estrés. A través de sus interacciones con las proteínas SIX y DACH, EYA4 contribuye a redes de regulación génica que controlan decisiones de destino celular, diferenciación y morfogénesis específica de tejidos. La actividad de fosfatasa de tirosina de la proteína se ha vinculado con la modulación de las respuestas al daño en el ADN y otros procesos dependientes de la fosforilación que determinan la homeostasis celular. La expresión alterada de EYA4 o la disrupción genómica se asocia con fenotipos sensoriales y cardíacos, y también se ha descrito en estudios de silenciamiento epigenético asociado a tumores, lo que respalda su relevancia para investigaciones mecanísticas en modelos de enfermedad humana.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO EYA4 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen EYA4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del EYA4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de EYA4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína EYA4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en EYA4 para la investigación de la señalización de EYA4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de EYA4 críticos para la función de EYA4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de EYA4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido EYA4 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido EYA4 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus EYA4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR EYA4 (h) y el plásmido HDR EYA4 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología EYA4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana EYA4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.