EYA2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403115-ACT

O EYA2 codifica o homólogo 2 de Eyes absent, um coativador transcricional e uma fosfatase de tirosina da família das haloácido desalogénases que modula programas de expressão génica durante o desenvolvimento e a homeostase tecidular. O EYA2 integra-se em redes regulatórias SIX/DACH e contribui para processos como a especificação do destino celular, a diferenciação e as respostas a danos no DNA por meio de sinalização dependente de fosforilação e do controlo transcricional. A expressão ou atividade desregulada de EYA2 tem sido associada a alterações na proliferação, migração e em programas epitelial–mesenquimais em múltiplos contextos de doença, sustentando a sua relevância em estudos de oncologia e biologia do desenvolvimento. Como regulador humano nuclear-citoplasmático, o EYA2 é frequentemente investigado quanto ao seu papel na sinalização de stress e em circuitos transcricionais específicos de linhagem.

EYA2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EYA2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EYA2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EYA2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EYA2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EYA2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EYA2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EYA2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EYA2 em células tumorais com expressão de EYA2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.