ETAR Double Nickaseプラスミド (h): sc-401000-NIC

エンドセリン受容体A型（ETAR）は、ヒトEDNRA遺伝子にコードされるGタンパク質共役型受容体（GPCR）で、エンドセリン-1に結合して血管平滑筋の収縮、細胞増殖、カルシウム依存性シグナル伝達を制御します。ETARは主にGq/11と共役し、ホスホリパーゼCを活性化してIP3/DAGを産生し、下流のMAPK経路およびRho/ROCK経路を作動させることで、血管運動トーヌスや組織リモデリングを形作るシグナルを統合します。EDNRAにより駆動されるシグナル伝達は、内皮細胞と平滑筋細胞のクロストークに影響し、多様な細胞環境における血管新生および炎症プログラムにも関与します。ETAR活性の制御異常は、心肺血管機能障害、線維化を伴うリモデリング、腫瘍微小環境に関わる過程と関連づけられており、EDNRAは受容体シグナル伝達ネットワークの機序解析に有用な標的です。

ETAR ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における EDNRA 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、EDNRA内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、EDNRAの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、EDNRAが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。