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ESE-1CRISPR激活质粒(h) | sc-403728-ACT | 20 µg | $397.00 |
ELF3 编码 ESE-1,这是一种上皮细胞特异表达的 ETS 家族转录因子,调控屏障组织中谱系特异性的基因表达与分化程序。ESE-1 能整合炎症及应激反应通路的信号,进而调节控制细胞极性、连接结构组织与增殖的转录网络;已有研究报道其与 MAPK/ERK 及 NF-κB 相关的调控回路存在串话。ELF3 活性失衡与上皮稳态改变以及肿瘤相关转录状态的变化有关,因此在研究致癌性重编程、与侵袭相关的表型以及上皮—免疫相互作用方面具有重要意义。作为 DNA 结合型调控因子,ESE-1 是一个便于操作的关键节点,可用于在人源细胞模型中解析启动子/增强子调控逻辑及情境依赖性的转录输出。
ESE-1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ELF3的表达。
ESE-1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的ELF3基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于ELF3转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性ESE-1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的ELF3位点,并能够研究内源性位点上依赖于ESE-1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ELF3表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ESE-1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。