Plasmide CRISPR/Cas9 KO Erythropoietin/EPO (h): sc-400283

Présentation

EPO code l’érythropoïétine, une hormone glycoprotéique sécrétée qui régule la survie, la prolifération et la différenciation des progéniteurs érythroïdes, principalement via la signalisation JAK2/STAT5 médiée par EPOR, avec une contribution supplémentaire des voies PI3K/AKT et MAPK. Chez l’adulte, la production d’EPO est étroitement contrôlée par la détection de l’oxygène via des programmes transcriptionnels dépendants de HIF, reliant l’hypoxie à l’homéostasie systémique des globules rouges. Une activité dérégulée de l’axe EPO/EPOR est impliquée dans les mécanismes sous-jacents à l’anémie et aux réponses associées à l’hypoxie, et elle est fréquemment étudiée dans le cadre de travaux plus larges sur le métabolisme du fer, l’inflammation et l’oxygénation tissulaire. Parce que l’EPO est un facteur sécrété, la régulation de son gène et les effets de signalisation en aval constituent également des marqueurs utiles du contrôle transcriptionnel, des interactions entre voies de signalisation des cytokines et de l’adaptation cellulaire au stress de faible disponibilité en oxygène.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Erythropoietin/EPO (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène EPO dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du EPO, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert EPO à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Erythropoietin/EPO.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en EPO pour l'étude de la signalisation de Erythropoietin/EPO, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de EPO essentiels à la fonction de Erythropoietin/EPO
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de EPO pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Erythropoietin/EPO plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Erythropoietin/EPO plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus EPO. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Erythropoietin/EPO plasmide HDR (h) et le Erythropoietin/EPO (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie EPO pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles EPO définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.