ephrin-A5 Plasmide Double Nickase (m): sc-420123-NIC

Efna5 codifica l’efrina-A5, un ligando ancorato tramite GPI per le tirosin-chinasi recettoriali EphA, che media una segnalazione dipendente dal contatto per coordinare il posizionamento cellulare, la formazione di confini e la guida assonale durante lo sviluppo del sistema nervoso. Le interazioni efina-A5–EphA regolano il rimodellamento del citoscheletro e la dinamica adesiva attraverso le GTPasi della famiglia Rho, influenzando l’estensione dei neuriti, il targeting sinaptico e il patterning tissutale. Nei modelli murini, un’alterazione della segnalazione di efrina-A5 è stata associata a difetti nella mappatura degli assoni corticotalamici e retinici, nella circuiteria ippocampale e in altri processi di neurosviluppo. La deregolazione delle vie Eph/efrine è studiata anche in contesti di migrazione e invasione cellulare aberranti, rendendo Efna5 un bersaglio rilevante per ricerche meccanicistiche in neurobiologia dello sviluppo e nella segnalazione associata a malattia.

ephrin-A5 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Efna5 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Efna5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Efna5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Efna5 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.