ephrin-A1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401309-NIC

EFNA1は、EphA受容体型チロシンキナーゼに対するグリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）アンカー型の膜結合リガンドであるエフリンA1をコードしており、隣接する細胞間の接触依存的シグナル伝達を媒介します。エフリンA1とEphAの結合は、RhoファミリーGTPase、MAPKシグナル、ならびに細胞骨格リモデリングと交差する経路を介して、細胞接着と反発、境界形成、協調的な遊走を制御します。内皮および上皮の文脈では、エフリンA1は血管新生のスプラウティング、組織パターニング、炎症性シグナルや増殖因子シグナルの調節に寄与します。EFNA1/EphAシグナルの破綻は、血管リモデリングの変化や侵襲性の細胞挙動と関連づけられており、微小環境依存的なシグナル伝達や腫瘍関連ストローマ相互作用の機構研究における有用な結節点となります。

ephrin-A1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における EFNA1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、EFNA1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、EFNA1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、EFNA1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。