Plásmido Doble Nickase (h) EphB2: sc-401642-NIC

EPHB2 codifica EphB2, una tirosina quinasa receptora de la familia Eph que se une a ligandos efriña‑B anclados a la membrana para impulsar una señalización dependiente del contacto. EphB2 regula el posicionamiento celular, la guía axonal y la formación de límites tisulares mediante señalización bidireccional que remodela el citoesqueleto de actina y modula la adhesión a través de vías que involucran GTPasas de la familia Rho, MAPK/ERK, PI3K y quinasas de la familia Src. En contextos epiteliales y neuronales, EphB2 contribuye a la migración celular y la compartimentalización, y las alteraciones de la señalización de EphB2 se han vinculado con fenotipos de crecimiento e invasión desregulados en modelos de cáncer. EphB2 también está implicado en procesos del neurodesarrollo y en la organización sináptica, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar la intercomunicación entre vías de señalización que determina el destino celular y la conectividad.

EphB2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EPHB2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EPHB2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EPHB2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EPHB2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.