Plasmide CRISPR d'Activation (h) eotaxin: sc-403103-ACT

CCL11 code l’éotaxine (CCL11), une chimiokine CC sécrétée qui se lie à CCR3 afin d’orienter la chimiotaxie des éosinophiles et d’autres leucocytes exprimant CCR3 vers les sites d’inflammation. La signalisation de l’éotaxine coordonne le trafic, l’adhésion et l’activation des leucocytes au sein des compartiments muqueux et vasculaires, modulant les réponses immunitaires de type 2 et les programmes de remodelage tissulaire. Une expression dérégulée de CCL11 a été associée à l’inflammation allergique et à l’asthme, ainsi qu’à des microenvironnements inflammatoires plus larges où le recrutement des éosinophiles et les interactions entre cytokines influencent la pathologie. Dans des modèles cellulaires humains, la modulation de CCL11 constitue un indicateur exploitable pour étudier les réseaux de chimiokines, les signaux guidant la migration leucocytaire et la régulation transcriptionnelle induite par les cytokines.

eotaxin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CCL11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

eotaxin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CCL11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CCL11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de eotaxin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CCL11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de eotaxin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie eotaxin dans les cellules tumorales présentant une expression de CCL11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.