Plasmide Double Nickase (h) Endothelin-3/EDN3/ET-3: sc-404436-NIC

EDN3 code l’endothéline-3 (ET-3), un ligand peptidique vasoactif sécrété des récepteurs de l’endothéline, avec une signalisation particulièrement marquée via EDNRB, qui régule la migration, la prolifération et la différenciation des cellules de la crête neurale. ET-3 active des voies médiées par des RCPG, notamment la signalisation PLCβ–IP3/Ca²⁺, l’activation de la PKC et des programmes MAPK/ERK en aval, qui influencent le développement des mélanocytes et des neurones entériques. En biologie du développement, l’activité de l’axe EDN3–EDNRB est essentielle à la formation du système nerveux entérique et à la pigmentation, reliant des altérations de la signalisation à des neurocristopathies congénitales. Une signalisation de l’endothéline dérégulée fournit également un cadre mécanistique pour étudier les décisions de destin cellulaire, la mise en place des patrons tissulaires et la communication avec le microenvironnement dans des contextes pertinents pour la maladie.

Endothelin-3/EDN3/ET-3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EDN3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EDN3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EDN3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EDN3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.