EN2/Engrailed 2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420172

Descripción general

Engrailed 2 (EN2) es un factor de transcripción homeobox que contribuye a organizar el patrón de la región en desarrollo del mesencéfalo–rombencéfalo y regula la diferenciación neuronal, la guía axonal y los programas de identidad regional en el sistema nervioso central del ratón. Al unirse al ADN a través de su homeodominio, EN2 coordina redes transcripcionales aguas abajo de gradientes de morfógenos, como las vías de señalización FGF y WNT, que moldean el desarrollo del cerebelo y del tectum. Las alteraciones en la dosis de EN2 o en su control regulador se han vinculado con fenotipos del neurodesarrollo y rasgos conductuales, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar la circuitería de regulación génica en el cerebro. EN2 también se utiliza como marcador y como punto de entrada mecanístico para investigar el control transcripcional del destino de los progenitores neurales y la formación de circuitos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO EN2/Engrailed 2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen En2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del En2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de En2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína EN2/Engrailed 2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en En2 para la investigación de la señalización de EN2/Engrailed 2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de En2 críticos para la función de EN2/Engrailed 2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de En2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido EN2/Engrailed 2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido EN2/Engrailed 2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus En2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR EN2/Engrailed 2 (m) y el plásmido HDR EN2/Engrailed 2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología En2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana En2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.