Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
EMSY Plasmide Double Nickase (h): sc-405722-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- EMSY Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il EMSY Double Nickase Plasmid (h) e il EMSY Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EMSY. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: EMSY Antibody (E-9): sc-515469
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
EMSY Plasmide Double Nickase (h) | sc-405722-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EMSY Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405722-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EMSY codifica una proteina nucleare associata alla cromatina, coinvolta nella regolazione della riparazione delle rotture a doppio filamento del DNA attraverso interazioni con BRCA2 e la modulazione della ricombinazione omologa. Influenzando lo stato della cromatina e la risposta al danno al DNA, EMSY contribuisce alla stabilità del genoma, alla segnalazione dello stress replicativo e al controllo dei checkpoint del ciclo cellulare. Alterazioni del dosaggio di EMSY o una sua espressione deregolata sono state collegate a una scelta anomala delle vie di riparazione e a programmi trascrizionali rilevanti per la trasformazione oncogena e la progressione tumorale. Di conseguenza, EMSY è spesso studiata nel contesto delle reti di riparazione del DNA, del rimodellamento della cromatina e dei determinanti della sensibilità allo stress genotossico nelle cellule umane.
EMSY Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EMSY nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EMSY. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EMSY. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EMSY interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.