EML1 Plasmide Double Nickase (h): sc-406445-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- EML1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il EML1 Double Nickase Plasmid (h) e il EML1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EML1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: EML1 Antibody (B-3): sc-390841
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
EML1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-406445-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EML1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-406445-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EML1 (echinoderm microtubule associated protein like 1) codifica una proteina legante i microtubuli che contribuisce all’organizzazione e alla stabilità dei microtubuli, supportando processi quali la funzione del fuso mitotico, il traffico intracellulare e la crescita dei neuriti. Attraverso la sua interazione con i polimeri di tubulina e con complessi associati ai microtubuli, EML1 influenza le dinamiche del citoscheletro necessarie per la divisione cellulare e la migrazione neuronale. Alterazioni genetiche di EML1 sono state collegate a fenotipi di neurosviluppo, coerentemente con un ruolo nello sviluppo corticale e nella morfogenesi dipendente dai microtubuli. In quanto regolatore del citoscheletro, EML1 rappresenta un nodo utile per studiare come l’architettura dei microtubuli si integri con il controllo del ciclo cellulare e con le vie della polarità cellulare.
EML1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EML1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EML1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EML1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EML1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.