EKLF/KLF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402366

Übersicht

KLF1 (erythroider Krüppel-like-Faktor; EKLF) ist ein Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der als Masterregulator der Festlegung der erythroiden Zelllinie und der terminalen Reifung roter Blutkörperchen fungiert. Er bindet an CACCC-Motive, um erythroidspezifische Genexpressionsprogramme zu steuern, darunter die Regulation von Globin-Genen, die Hämoglobinsynthese, der Umbau von Membran und Zytoskelett sowie die Koordination von mit der Enukleation assoziierten Signalwegen. KLF1 interagiert mit Chromatin und der Transkriptionsmaschinerie, um Differenzierungszustände in der Erythropoese und die metabolische Anpassung während der Erythropoese zu prägen. Genetische Veränderungen oder eine dysregulierte Expression von KLF1 sind mit vererbten Phänotypen roter Blutkörperchen und Defekten im Hämoglobinwechsel (Hemoglobin Switching) verknüpft, was seine Relevanz für Studien zu anämiebezogenen Mechanismen und zur Entwicklungsbiologie der erythroiden Linie unterstreicht.

Das EKLF/KLF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KLF1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KLF1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KLF1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die EKLF/KLF1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KLF1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der EKLF/KLF1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KLF1-Exone abzielen, die für die EKLF/KLF1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KLF1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom EKLF/KLF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom EKLF/KLF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KLF1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das EKLF/KLF1 HDR-Plasmid (h) und EKLF/KLF1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KLF1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KLF1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.