Plásmido Doble Nickase (m) eIF4E: sc-420148-NIC

El gen **Eif4e** en ratón codifica **eIF4E**, la subunidad de unión al cap del complejo de iniciación de la traducción **eIF4F**, que reconoce el cap de **7‑metilguanosina** y promueve el reclutamiento del ribosoma al ARNm. La actividad de eIF4E integra señales de nutrientes y factores de crecimiento mediante la regulación **mTORC1–4E‑BP** y coopera con la fosforilación dependiente de **MAPK/MNK** para ajustar la traducción selectiva de transcritos implicados en proliferación, metabolismo y respuestas al estrés. La alteración en la abundancia o la regulación de eIF4E se asocia con una reprogramación de la traducción y con programas de crecimiento celular desregulados, lo que convierte a **Eif4e** en un nodo clave para estudiar el control postranscripcional en biología del cáncer y en fenotipos del desarrollo. En modelos murinos, la perturbación de **Eif4e** permite la disección mecanística de la traducción dependiente de cap, la proteostasis y la expresión génica acoplada a la señalización.

eIF4E El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Eif4e en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Eif4e. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Eif4e. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Eif4e alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.