20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
Le Plasmide Double Nickase (h) eIF3η correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
Le plasmide eIF3η Double Nickase (h) et le plasmide eIF3η Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant EIF3B. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: eIF3η Antibody (C-5): sc-137214