Plásmido CRISPR de Activación (h) eIF3η: sc-400817-ACT

EIF3B codifica la subunidad eta del factor de iniciación de la traducción eucariota 3 (eIF3η), un componente central del complejo eIF3 que coordina el ensamblaje del complejo de preiniciación 43S y favorece el reclutamiento de ARNm a la subunidad ribosomal 40S. Mediante la regulación del inicio de la traducción, EIF3B influye en la remodelación del proteoma durante el crecimiento celular, las respuestas al estrés y la progresión del ciclo celular, e integra señales que determinan la síntesis proteica global y selectiva por transcrito. La desregulación del control de la traducción en la que participan subunidades de eIF3 se ha vinculado a programas de proliferación alterados y a la transformación celular, lo que convierte a EIF3B en un nodo útil para estudiar la carga de ribosomas, la selectividad de ARNm y la proteostasis. Los investigadores suelen analizar EIF3B para conectar cambios en la función de los factores de iniciación con desplazamientos, a nivel de vías, en las salidas de expresión génica.

eIF3η El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de EIF3B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

eIF3η El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus EIF3B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional EIF3B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de eIF3η. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo EIF3B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de eIF3η en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía eIF3η en células tumorales con expresión de EIF3B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.