eIF2α Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420141

Descripción general

Eif2s1 codifica la subunidad alfa del factor de iniciación de la traducción eucariota 2 (eIF2α), un regulador central de la iniciación de la traducción dependiente de cap y del escaneo del ARNm, gracias a su función en la entrega del Met‑ARNtᵢ iniciador al ribosoma. La fosforilación de eIF2α en Ser51 integra la respuesta integrada al estrés (ISR) aguas abajo de quinasas como PERK, PKR, GCN2 y HRI, reprimiendo la síntesis global de proteínas y, al mismo tiempo, favoreciendo programas selectivos de traducción, incluida la transcripción dependiente de ATF4. Este nodo conecta el estrés del RE, la privación de aminoácidos, la detección de virus y el estrés oxidativo con decisiones de proteostasis, autofagia y apoptosis. La desregulación de la señalización de eIF2α se estudia ampliamente en contextos de neurodegeneración, biología del estrés metabólico, adaptación de células cancerosas y señalización inflamatoria.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO eIF2α (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Eif2s1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Eif2s1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Eif2s1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína eIF2α.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Eif2s1 para la investigación de la señalización de eIF2α, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Eif2s1 críticos para la función de eIF2α
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Eif2s1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido eIF2α CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido eIF2α CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Eif2s1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR eIF2α (m) y el plásmido HDR eIF2α (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Eif2s1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Eif2s1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.